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使用超濾離心管時(shí),需要注意的事項(xiàng)

  • 發(fā)布日期:2022-07-07      瀏覽次數(shù):1086
    •    超濾離心管是一種利用離心技術(shù),用于生物樣品的分離和制備的管狀試樣容器。通過(guò)離心機(jī)高速旋轉(zhuǎn)提供的巨大離心力,使液體中的微小顆粒沉降,從而和溶液分離。離心管由高質(zhì)量的透明高分子材料聚丙烯制成,廣泛應(yīng)用于多種試驗(yàn)操作,滿足生物分析級(jí)要求。
        
        使用超濾離心管時(shí),需要注意的事項(xiàng):
        1、選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書,注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。
        
        2、新買來(lái)的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量*過(guò)膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過(guò)管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預(yù)冷。
        
        3、直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速rpm換算成g之后,有所不同。離心機(jī)的加速度調(diào)至Z低檔,減小對(duì)膜的壓力。注意,一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后,方可離開離心機(jī),否則離心機(jī)出問(wèn)題時(shí),無(wú)法第一時(shí)間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說(shuō)明書調(diào)整(角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直)。在實(shí)際使用中,一般轉(zhuǎn)速開的比說(shuō)明書里的要低,這樣可以延長(zhǎng)離心管的使用壽命。
        
        4、當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí),取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍(lán)色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測(cè),繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過(guò)程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過(guò)高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時(shí)超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。
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